NucleoSpin RNA (250)

El Kit NucleoSpin® RNA es un kit recomendado para el aislamiento de RNA de células y tejidos y demás fluídos biológicos libres de células, bacterias y levaduras, obteniendo un RNA de un alto grado de pureza que puede ser utilizado directamente en posteriores aplicaciones sin necesidad de purificación previa. Además, el RNA aislado con este kit tiene una alta integridad, reportando un RIN (número de integridad del RNA) generalmente mayor de 9, teniendo en cuenta que este dato depende en gran medida de la calidad de la muestra de partida.

Uno de los aspectos más importantes en el aislamiento de RNA es evitar la degradación durante el procedimiento de aislamiento. Con el kit NucleoSpin® RNA, las células se lisan mediante incubación en una solución que contiene grandes cantidades de iones caotrópicos, la cual inactiva inmediatamente las RNAsas, que están presentes en prácticamente todos los materiales biológicos, y crea condiciones de unión adecuadas que favorecen la adsorción de RNA en la membrana de sílice. El ADN contaminante, que también está unido a la membrana de sílice, se elimina mediante una solución de rDNasa que se aplica directamente sobre la membrana de sílice durante la preparación (la rDNasa sin RNAsa se suministra con el kit). Los sencillos pasos de lavado con dos tampones diferentes eliminan sales, metabolitos y componentes celulares macromoleculares. Finalmente, el ARN puro se eluye en condiciones de baja fuerza iónica con H2O sin RNAsa.

El protocolo se puede realizar a temperatura ambiente.

• Manipulación: centrifugación o vacío
• Formato: mini prep (columnas individuales)
• Tecnología: membrana de sílica
• Aplicaciones posteriores: RT-qPCR, Northern blot, RNA seq
• Capacidad teórica de unión: 200 µg
• Muestra de partida: células, bacterias, tejidos humanos o animales…
• Clarificación del lisado por centrifugación (Filtro Nucleospin)
• Pureza del ARN obtenido: 1.9-2.1
• Tiempo de procesado: 35 min/6 preps
• Tamaño de los fragmentos: > 200 nt
• RIN típico: >9
• Cantidad de muestra de partida: <5 x 10⁶ céls., <30 mg tejido humano/animal, <10⁹ bacterias, <10⁸ levaduras
• Volumen de elución: 30-120 µl
• Rendimiento típico: 14 µg (10⁶ céls HELA), 70 µg (10⁹ bacterias)